av在线地址丨一级网站在线观看丨呦呦在线视频丨免费久久久久丨天天躁日日躁狠狠躁av麻豆男男丨西西人体www44rt大胆高清丨欧美成人一二三丨日韩毛片av丨天天狠天天添日日拍捆绑调教丨一级毛片一级黄片丨免费无码又爽又刺激网站丨久久不见久久见免费视频4丨欧美伦乱丨色狠狠久久av大岛优香丨eeuss一区二区丨亚洲人成网址丨久久精品视频在线免费观看丨手机成人在线视频丨羞羞视频网站免费丨www.欧美在线观看

  HAD-V5YX 分光光度計原理操作方法

原理

分光光度計采用個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關系如下式：

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度；

I0為入射的單色光強度；

I 為透射的單色光強度；

T 為物質的透射率；

k 為摩爾吸收系數；

L 為被分析物質的光程，即比色皿的邊長；

c 為物質的濃度；

蛋白質的直接定量（UV法）

這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單，測試空白液，然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在些雜質，般要消除320nm 的“背景"信息，設定此能“開"。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，佳的線性范圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時，發現讀數“漂移"。這是個正常的現象。事實上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不過1%，表明結果非常穩定。漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度，乘以定的系數，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較。

比色法蛋白質定量

蛋白質通常是多種蛋白質的混合物，比色法測定的基礎是蛋白質構成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應，產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關，從而反應蛋白質濃度。

比色方法

般有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方法。

Lowry 法：以早期的Biuret 反應為基礎，并有所改。蛋白質與Cu2 反應，產生藍色的反應物。但是與Biuret 相比，Lowry 法敏感性更。缺點是需要順序加入幾種不同的反應試劑；反應需要的時間較長；容易受到非蛋白物質的影響；含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物質的蛋白不適合此種方法。

BCA（Bicinchoninine　acid　assay）法：這是種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2 反應產生Cu ，后者與BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關系較強，反應后形成的化合物非常穩定。相對于Lowry法，操作簡單，敏感度。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質之間以及去污劑的干擾。

操作方法

1.接通電源，打開儀器開關，掀開樣品室暗箱蓋，預熱10分鐘。

2.將靈敏度開關調至“1"檔（若零點調節器調不到“0"時，需選用較。）

3.根據所需波長轉動波長選擇鈕。

4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內，使空白管對準光路。

5.在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器，使讀數盤針向t=0處。

6.蓋上暗箱蓋，調節“100"調節器，使空白管的t=100，針穩定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

7.比色畢，關上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。